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Balance CD 293 无血清培养基使用方法

型号:CW001 访问量:156发布时间:2020/10/10 单位:上海徕创生物科技ballbet登录

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产品简介

CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品简介:
Balance CD 293 培养基
Catalog Number: CW001

293细胞无血清悬浮培养基,CELLWISE (自主研发)的Balance CD 293培养基,货号CW001,适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞(如293-F, 293-T, Expi-293F等)的高密度生长和瞬时转染表达。该培养基化学成分确定,无血清、无蛋白、不含动物源性组分,可高效表达各种重组蛋白及单抗。CELL-WISE的293培养基自主研发的一款培养基,一流的质量,平民的价格。全国诚招代理商,欢迎广大新老客户前来咨询采购。

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产品信息

CW001型Balance CD 293 无血清培养基产品信息:

品牌

产品名称

货号

规格

CELL-WISE

BalanceCD293 培养基

CW01001

1L


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产品描述

CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品描述:
Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞(如293-F,293-T, Expi-293F等)的高密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成份,无需添加任何添加物即可使用。(注意:此培养基不包含抗生素以及血清)

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产品用途

CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品用途:
CELL-WISE的Balance CD 293
无血清培养基仅用于科学研究,不适用于人类或动物的诊断和治疗。

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产品特点

CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品特点:
1、瞬时转染专用培养基,适用于HEK293细胞高密度悬浮培养
2、无蛋白、无动物源、化学成分限定
3、即用型完全培养基,无需添加额外成分

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技术参数

CW001型 Balance CD 293 无血清培养基技术参数:
1、外观:澄清透明红色液体
2、渗透压:275±15 mOSM
3、pH:6.9-7.4
4、无菌检测:无菌
5、内毒素:<5 EU/mL
6、储存条件:2-8℃,避光
7、效期:12个月

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使用方法

CW001型 Balance CD 293 无血清培养基使用方法:
1、细胞驯化
(1)直接驯化
大部分情况下,培养于其他培养基中的细胞,可以直接适应Balance CD 293 medium,只要按照日常传代方式(稀释)更换培养基即可。
(2)渐进式驯化
注意:选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化
①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定,当细胞密度达到2x106 cells/ml后进行传代,传代细胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL,5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25;
②将细胞置于37℃,5% CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养;
③当细胞密度3-4天后达到3x106 cells/ml且细胞活率>90%,传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50,细胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如细胞生长慢,可离心上清,留20%条件培养基,加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基,继续培养;
④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90)直到100%的Balance CD 293培养基;
⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养,传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×106 cells/mL,细胞活率大于90%,这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL,一般传代2-3次后再进行转染实验。
注意: 一般细胞驯化过程中,前三代细胞的状态可能不是很好,但一般从第四代开始状态会有改善

2、细胞传代
(1)取细胞培养样品,人工或ballbet贝博注册测定细胞密度以及活率;
(2)计算传代所需的细胞用量,建议起始细胞密度为0.2-0.4×106 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL(100 mL的培养瓶)或50-60 mL(250 mL 的培养瓶);
(3)将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养,3-4天传代一次。细胞转染在Balance CD 293培养基中,采用商业化转染试剂(例如 Gibco 293Fectin™
ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的高效转染。

3、细胞复苏
(1)迅速取出冻存的细胞,在37℃水浴条件下进行解冻(可以在水中轻轻晃动,时间控制在60s以内);
(2)轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15mL无菌离心管中,逐滴加入10 mL预热到37℃的培养基,离心换液(100 g,5 min)去除全部上清,加入新鲜培养基重悬,使得细胞密度达
到0.4-0.6×106 cells/mL;
(3)将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养;
(4)2-4天后通过人工或ballbet贝博注册测定细胞的密度以及活率,如果细胞密度达到1.0×106 cells/mL,活率达到85%以上则可进行传代培养;
(5)如果细胞密度低于1.0×106 cells/mL,则建议对细胞进行离心(100 g,5 min),然后重悬于20-30 mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6×106 cells/mL 左右,并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。

4、细胞冻存

(1)冻存细胞时,要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells;
(2)事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积;
(3)制备细胞冻存液:46.25% 的新鲜Balance CD 293培养基+46.25% 条件Balance CD 293 培养基,混合之后再加入7.5% DMSO,存放在4℃,一般为当天用当天制备;
(4)对细胞样品进行计数;
(5)取样计数,以100 g,3-5 min的条件离心收集细胞,然后用冻存培养基( 4℃ )重悬细胞,使得细胞密度为 5-10×106 cells/mL;
(6)取样计数,调整细胞密度;迅速分装细胞到无菌的冻存管中,一般2 mL 的冻存管放1-1.5 mL,贴好标签,密封;
(7)将细胞冻存管放到程序降温冻存盒(注意填充异丙醇,4℃预冷)中,置于-80℃ 冰箱(每分钟下降1℃),过夜存放后将细胞转入液氮罐中进行保存。

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