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    技术文章

    MS培养基配制标准操作步骤

    点击次数:11099 发布时间:2013/7/26 8:47:33

     实验步骤

    1  MS培养基母液的母液的配制
           由于组培的植物不同,需要配制不同的培养基,为减少工件量,可把药品配成浓缩液。有些微量元素和有机成分成分浓度极低,因此,先配制成母液的母液。建议浓度如下表: 
     
    药品名称
    配制的终浓度
    配制50ml的总质量(g)
    烟酸
    0.01g/ml
    0.5
    VB6
    0.1g/ml
    5
    甘氨酸
    0.2g/ml
    10
    NaMoO4.2H2O
    0.05g/ml
    2.5
    CuSO4.5H2O
    0.05g/ml
    2.5
    KI
    0.1g/ml
    5
    H3BO3
    0.062g/ml
    3.1
    MnSO4. H2O
    0.169g/ml
    8.45
    ZnSO4. 7H2O
    0.172g/ml
    8.6
    CoCl.6H2O
    0.05g/ml
    2.5
    VB1
    0.1g/ml
    5
     
      母液的母液的配制过程:
     
    (1)根据表中的浓度,称取50ml体积的药品的质量。
    (2)加入到相应的溶液中,定容至50ml。
    (3) 放入密封50ml塑胶管中,-20℃保存。

    2  MS培养基母液浓度表:
    (1)MS-A(macro):为工作液浓度的50倍
     
    NH4NO3
    41.25g/500ml
     KNO3
    47.5g/500ml
    MgSO4·7H2O
    9.25g/500ml
    KH2PO4
    9.25g/500ml
            (2)MS-B(micro):为工作液浓度的100倍
         
    H3BO3
    0.124g/200ml
    MnSO4·4H2O
    0.338g/200ml
    ZnSO4·7H2O
    0.172g/200ml
    CuSO4·5H2O
    0.0005g/200ml
    CoCl2·6H2O
    0.0005g/200ml
    KI
    0.0166g/200ml
    Na2MoO4·2H2O
    0.005g/200ml
            (3) MS-C:为工作液浓度的100倍
    CaCl2·2H2O
    22.0g/500ml
            (4) MS-D:为工作液浓度的100倍
    烟酸
    0.01g/200ml
    VB6
    0.01g/200ml
    VB1
    0.002g/200ml
    甘氨酸
    0.04g/200ml
     
      (5)MS-E:为工作液浓度的100倍
    Na2-EDTA
    3.725g/500m
    FeSO4·7H2O
    2.875g/500m
     
     3  母液的配制
        MS-A:称取NH4NO3  41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸馏水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
        MS-B:吸取母液的母液如下,蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。

     
    母液的母液量
    母液终浓度
    H3BO3
     
    0.124g/200ml
    MnSO4·4H2O
     
    0.338g/200ml
    ZnSO4·7H2O
     
    0.172g/200ml
    CuSO4·5H2O
     
    0.0005g/200ml
    CoCl2·6H2O
     
    0.0005g/200ml
    KI
     
    0.0166g/200ml
    Na2MoO4·2H2O
     
    0.005g/200ml

        MS-C:称取CaCl2·2H2O 22.0g蒸馏水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
        MS-D:吸取母液的母液如下,蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.
     
    母液的母液量
    母液终浓度
    烟酸
     
    0.01g/200ml
    VB6
     
    0.01g/200ml
    VB1
     
    0.002g/200ml
    甘氨酸
     
    0.04g/200ml
     
       MS-E:称取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸馏水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。

    4  
    MS培养基基本工作液的配制 
         MS培养基基本工作液质量表
    组成成分
    数量(mg/l)
    组成成分
    数量(mg/l)
    NH4NO3
    1650
    Na2-EDTA
    37.3
    KNO3
    1900
    FeSO4·7H2O
    27.8
    CaCl2·2H2O
    440
    CuSO4·5H2O
    0.025
    MgSO4·7H2O
    370
    蔗糖
    30
    KH2PO4
    170
    肌醇
    100.0
    KI
    0.83
    烟酸
    0.5
    H3BO3
    6.2
    盐酸吡哆醇
    0.5
    MnSO4·4H2O
    22.3
    甘氨酸
    2.0
    ZnSO4·7H2O
    8.6
    盐酸硫铵等
    0.4
    Na2MoO4·2H2O
    0.25
     
     
    CoCl2·6H2O
    0.025
    pH
    5.8

        (1)配制1升工作液,烧杯中放入700ml左右的蒸馏水,按顺序分别吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
        (2)加入固体蔗糖30g(根据具体实验调节浓度),溶解。
        (3) 加入所需的激素。定容至1000ml。
        (4)0.1-1mol/l的HCl或NaOH调整pH值。
        (5)如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%~15%。
        (6) 液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法。固体培养基采用高温高压灭菌方法。倒入三角瓶等培养器皿中,封口消毒。
        (7)工作液配制的注意事项:
               由于培养基内有丰富的营养物质,极利细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。
               高温高压消毒: 一般用消毒锅消毒,注意消毒锅不能装的过满,锅内保持1.1Kg/cm2的压力,温度120℃左右,大约15-20分钟即可。
               过滤消毒: 一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高温高压法消毒,可用过滤消毒,可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中,过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行,以避免污染培养基。

    原创作者:南京森贝伽生物科技ballbet登录

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